项目背景

　　lncRNA与编码蛋白的mRNA可能存在不经miRNA的直接结合机制，如lncRNA TINCR通过转录后调控机制介导人类的表皮分化，TINCR通过一个约为25个核苷酸的box与mRNA直接结合，调控分化相关基因的表达水平。LncRNA可以通过调节mRNA的稳定性及翻译来调控基因的活性，lncRNA与mRNA的结合既可以使mRNA稳定性增加，上调蛋白水平的表达量，也能够降低mRNA的翻译效率，例如lncRNA 1/2-sbsRNAs可与mRNA的3’-UTR区Alu元件不完全配对结合，形成RNA结合蛋白Stau1的结合位点，促进Stau1与mRNA的结合，通过SMD（stau1-mediated mRNA decay）途径使mRNA降解。通过PUBMED检索，课题组发现SNHG16在这个领域的研究还是一片空白，由于lncRNA与mRNA的结合的基础是碱基配对，因此要研究SNHG16是否能与mRNA结合，首先要分析其与基因mRNA的互补配对情况。

　　EGR3是早期生长反应基因（early growthresponse, EGR）家族具有DNA结合活性的蛋白，在转录水平上调控基因表达。EGR家族成员都包含有一个高度保守的可与DNA结合的结构域，该结构域由三个Cys2His2锌指结构组成，能够特异性识别并与其下游调控基因的启动子区结合，从而发挥转录调控作用。EGR1是EGR家族中目前研究比较多的成员，文献报道其对转录的调控具有双重作用，既能发挥转录激活也能发挥转录抑制作用。

　　Gabs家族蛋白是一类在进化过程中高度保守的支架蛋白，该家族成员包括Gab1、Gab2、Gab3。Gab2支架蛋白的结构组成主要包括N-末端的Pleckstrin同源结构域，中间富含脯氨酸的基序，以及含多个酪氨酸残基的C-末端。Gab2可以通过两种机制来调节自身的亚细胞定位。首先，PH结构域是Gabs家族蛋白质最保守的元件，可以识别细胞膜的磷脂成分，诱发细胞膜对Gab2的募集，实现对Gab2的膜定位；另一种机制通过Gab2的SH2和SH3结构域实现膜受体和Gab2的偶联。在Gab2介导的信号转导过程中，位于C-末端的多个酪氨酸残基被磷酸化后与富含SH2结构域的游离信号转运分子结合，并介导Gab2与其下游的效应蛋白间的相互调节，实现信号传递。Gab2主要参与SHP2/RAS/ERK和PI3K/AKT两条经典的信号通路。

　　综上所述，课题组提出假说：lncRNA SNHG16直接与EGR3 mRNA结合，影响EGR3 mRNA的翻译，EGR3作为转录因子能够与Gab2的启动子结合调控Gab2的转录起始，EGR3表达量的变化影响Gab2表达，最终通过Gab2下游的SHP2/RAS/ERK通路和PI3K/AKT通路影响非小细胞肺癌的发展。

　　项目内容

　　1.SNHG16、EGR3在NSCLC发展中的作用及对Gab2介导的SHP2/ERK通路及PI3K/Akt通路活化的影响。

　　2.NSCLC中lncRNA SNHG16与EGR3 mRNA的相互作用机制研究。

　　3.转录因子EGR3对Gab2的转录调控机制研究

　　项目对象

　　8株实验中常用的肺腺癌和肺鳞癌细胞（各4株，NCI-H2170、NCI-H596、NCI-H520、SK-MES-1、SPC-A-1、NCI-H1395、NCI-H1975、A549）以及人支气管上皮样细胞BEAS-2B。

　　项目时间

　　自2021年2月至2025年2月

　　项目联系人

　　朱少敏 联系电话：15010624992